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使用巴氏染色液后結(jié)果不理想的原因有哪些?

文章出處:本站 人氣:1660 發(fā)表時間:2021-04-10 08:47:31

巴氏染色液染片胞漿、胞核、胞膜清晰、易辨,紅藍(lán)相間。進(jìn)口原料配制,染液的穩(wěn)定性好,無嗅、無味、無刺激、吸附性強、不脫色,對涂片無特殊要求。研制的改良巴氏染液染色全程只需要5分鐘,改良巴氏染液染色全程只需要3分鐘,且步驟簡單,只需初染—復(fù)染—增色三步,省時、準(zhǔn)確、操作簡便,即來即檢,立等可取檢查結(jié)果,無需梯度酒精脫水,二甲苯透明,可直接封片保存。


檢驗原理:

巴氏染色液中有蘇木素、橘黃、伊紅、俾士麥棕及亮綠等染料,其中蘇木素能與細(xì)胞核的核酸結(jié)合而顯紫藍(lán)色,其他染料可以與細(xì)胞漿中不同的化學(xué)成分結(jié)合而顯顏色。

使用方法:


1.將涂片置于95%乙醇中固定15分鐘以上;


2.依次浸入80%、50%乙醇中各30秒,水洗1~2分鐘;


3.浸入蘇木精染液中3~5分鐘,水洗1~2分鐘;


4.浸入鹽酸酒精分化液中分化數(shù)秒,水洗1~2分鐘;


5.浸入返藍(lán)液中數(shù)秒,水洗1~2分鐘;


6.置于95%乙醇中漂洗,水洗甩干;


7.浸入橘黃G染液染中1~3分鐘;95%乙醇漂洗、95%乙醇漂洗、100%乙醇漂洗各一次,時間各10~20秒;


8.浸入EA36染液(或EA50染液)中染色2~5分鐘,95%乙醇漂洗、95%乙醇漂洗、100%乙醇漂洗各一次,時間各10~20秒;


9.浸入浸蠟脫蠟透明液中2分鐘;


10.中性樹膠封固;


11.鏡檢。


染色結(jié)果:


上皮細(xì)胞:胞核呈紫藍(lán)色,核仁紅色;胞質(zhì)受色隨分化程度和細(xì)胞類型不同可染成藍(lán)綠色、粉紅色或桔黃色;紅細(xì)胞:鮮紅色或橙紅色。白細(xì)胞:胞核藍(lán)紫色,胞質(zhì)淡藍(lán)或淡綠色;粘液:淡藍(lán)或粉紅色。


使用巴氏染色液染色結(jié)果不理想原因分析:


1、細(xì)胞核著色不佳


(1)細(xì)胞核著色過淺:


鹽酸分化時間過長或蘇木素染液時間過長。需要縮短分化時間或延長堿化時間;每日加入少量新鮮蘇木素染液或重新配制蘇木素液。


在固定之前制片干燥。所以對巴氏染色的制片需要嚴(yán)格遵守濕固定的原則。


自來水的PH值偏酸性。使用堿性溶液。


(2)細(xì)胞核著色過深:


鹽酸溶液濃度不夠。適當(dāng)加入幾滴鹽酸以增加濃度。


制片用高于95%以上濃度的酒精固定后可以出現(xiàn)染色過深。應(yīng)用95%酒精固定。


2、細(xì)胞漿著色不佳


(1)如果全片內(nèi)胞漿都淡染,則需要延長染色時間或更換新液。


(2)如果胞漿不分色,均為淺紅色。制片在固定前干燥或制片被有大量球菌樣細(xì)菌影響胞漿染色。此情況可以適當(dāng)增加染色時間能夠部分糾正不分色狀況。


(3)胞漿染成灰色或紫色,是由于蘇木素染色時間過長或鹽酸分化不佳。經(jīng)過褪色后重新蘇木素可以糾正。


(4)由于標(biāo)本的不同,同樣配方的EA染液可造成偏藍(lán)、偏綠和偏紅,對不同的標(biāo)本應(yīng)該使用不同的EA染液。一般認(rèn)為,EA36和EA50用于婦科標(biāo)本,而EA65或改良EA用于非婦科標(biāo)本。


(5)胞漿不分色的另一重要原因是由于EA染液的PH值不恰當(dāng)所致。如染色為紅色,可以加少許磷鎢酸溶液糾正;如染色均為藍(lán)色或綠色,可以加少許飽和碳酸鋰溶液糾正。對于改良EA染液,每100ml染液加入2ml冰醋酸后染色效果更佳;染液使用更持久。

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