革蘭氏染色液的原理
細(xì)菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶紫染色,再經(jīng)碘液媒染(以增加染料與細(xì)胞的親和力)后,用酒精或丙酮脫色,再用復(fù)染色劑染色。不被脫色而保持原顏色者為革蘭紙陽(yáng)性菌(G+);被脫色后又被染上復(fù)染劑的顏色者為革蘭氏陽(yáng)性菌(G-)。此法可將細(xì)菌分為兩大類。
革蘭氏染色液的機(jī)理主要是利用兩類細(xì)菌的細(xì)胞壁成分和結(jié)構(gòu)不同。革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁中含有較多的類脂質(zhì),而肽聚糖的含量較少。當(dāng)用乙醇或丙酮脫色時(shí),類脂質(zhì)被溶解,增加了細(xì)胞壁的通透性,使初染后的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出,結(jié)果細(xì)胞被脫色,經(jīng)復(fù)染后,又染上復(fù)染液的顏色;而革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁中肽聚糖的含量多且交聯(lián)度大,類脂質(zhì)含量少,經(jīng)乙醇或丙酮洗脫后,肽聚糖層的孔徑變小,通透性降低,因此,細(xì)胞仍保留初染時(shí)的顏色。
【實(shí)驗(yàn)材料、藥品及器具】
1、菌種:大腸桿菌(Escherichia coli),枯草芽孢桿菌(Bacillus Subtilis),金黃色葡萄球菌(Staphylococeus auresu)
2、染液:草酸銨結(jié)晶紫液,革蘭氏碘液,95%的酒精,藏花紅液
3、器皿洗凈的載玻片6片、顯微鏡、酒精燈、接種環(huán)、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、鑷子、玻璃缸、瓶裝蒸餾水
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1、取培養(yǎng)12-24h的大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌分別涂片、固定。
2、加草酸銨結(jié)晶紫染色劑一滴,染色1分鐘。
3、傾去染液并用洗瓶裝水輕輕沖洗。
4、加碘液染1分鐘,水洗,然后用吸水紙吸干。
5、將載玻片略傾斜,滴加95%酒精脫色(洗至流下的酒精中無(wú)紫色時(shí)為止),然后水洗。
6、加藏花紅復(fù)染,染色30分鐘,水洗,用吸水紙吸干或烘干。
7、用油鏡鏡檢觀察。