安徽血小板稀釋液廠家接受啊血細(xì)胞五分類技術(shù)及其應(yīng)用進(jìn)展
血細(xì)胞分析儀是醫(yī)院臨床檢驗(yàn)應(yīng)用非常廣泛的儀器之一,是指對一定體積內(nèi)血細(xì)胞數(shù)量及異質(zhì)性進(jìn)行分析的儀器。
20世紀(jì)9o年代以來,隨著電子技術(shù)、流式細(xì)胞技術(shù)、激光技術(shù)、電子計(jì)算機(jī)技術(shù)和新熒光化學(xué)物質(zhì)等各種高新技術(shù)在血細(xì)胞分析儀中的應(yīng)用.
使血細(xì)胞分析儀的檢測原理不斷完善、測量參數(shù)不斷增加、檢測水平不斷提高.尤其在白細(xì)胞五分類技術(shù)方面,已發(fā)展到利用多項(xiàng)技術(shù)(如射頻、細(xì)胞化學(xué)染色、流式細(xì)胞術(shù)和熒光染色技術(shù)等)聯(lián)合同時(shí)檢測一個(gè)白細(xì)胞.再用先進(jìn)的計(jì)算機(jī)技術(shù)區(qū)分、辨別經(jīng)上述方法處理后的各自細(xì)胞間的細(xì)胞差別.綜合分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),得出較為準(zhǔn)確的白細(xì)胞分類結(jié)果。
為臨床疾病的診斷、治療提供了重要的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。近年來??梢詫Π准?xì)胞進(jìn)行五分類計(jì)數(shù)的血細(xì)胞分析儀已經(jīng)普遍使用。本文就目前血細(xì)胞五分類測定中常用技術(shù)及其zui新應(yīng)用進(jìn)展作一綜述。
1 血細(xì)胞五分類技術(shù)的原理
1.1 流式細(xì)胞術(shù)
流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry,F(xiàn)CM)是一種綜合應(yīng)用光學(xué)、機(jī)械學(xué)、流體力學(xué)、電子計(jì)算機(jī)、細(xì)胞生物學(xué)、分子免疫學(xué)等學(xué)科技術(shù),使被測溶液流經(jīng)測量區(qū)域,并逐一檢測其中每一個(gè)細(xì)胞的物理和化學(xué)特性,從而對高速流動(dòng)的細(xì)胞或亞細(xì)胞進(jìn)行快速定量測定和分析的方法。
首先,待測細(xì)胞經(jīng)處理或染色后被壓人流動(dòng)室,與此同時(shí),不含細(xì)胞的緩沖液在高壓下從鞘液管噴出,鞘液管人口方向與待測樣品流成一定角度,這樣鞘液就能被包繞著樣品高速流動(dòng),組成一個(gè)圓形的流束,待測細(xì)胞在包繞下單行排列,依次通過檢測區(qū)域.在激光束的照射下產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。
這兩個(gè)光源信號(hào)分別反映了細(xì)胞體積的大小和內(nèi)部的信息.經(jīng)光電倍增管接收后可轉(zhuǎn)換為電信號(hào),再通過模,數(shù)轉(zhuǎn)換器.將連續(xù)的電信號(hào)轉(zhuǎn)換為可被計(jì)算機(jī)識(shí)別的數(shù)字信號(hào),經(jīng)計(jì)算機(jī)處理,可將分析結(jié)果顯示在屏幕上。
為了保證細(xì)胞單個(gè)排列地逐一通過檢測區(qū)域,鞘流技術(shù)在流式細(xì)胞術(shù)中被廣泛應(yīng)用。根據(jù)層流理論,由于兩種液體的流速和壓力不同。在一定條件下樣品溶液與包裹它的鞘液在流動(dòng)中可以保持相互分離并且同軸。
同時(shí)鞘液流可以加速樣品溶液中顆粒的流動(dòng)并迫使他們的流動(dòng)軌跡保持在液流的中軸線上,使細(xì)胞單排列地逐一通過檢測區(qū)域,這便是所謂的液流聚焦原理
1_2 阻抗法
根據(jù)庫爾特原理,將不良導(dǎo)體血液按一定比例稀釋于等滲的電解液中,在小孔電極的兩側(cè)加一恒流源.在負(fù)壓作用下,使稀釋的血細(xì)胞通過小孔。當(dāng)細(xì)胞通過截面時(shí)會(huì)由于電阻增大產(chǎn)生相應(yīng)的脈沖,其脈沖的幅度與細(xì)胞的體積成正比,脈沖的頻度與細(xì)胞的數(shù)量成正比。這便是的庫爾特原理或稱變阻脈沖原理。利用庫爾特原理可以有效地區(qū)分淋巴及單核細(xì)胞。
1.3 激光散射法/多角度偏振光散射技術(shù)
根據(jù)光散射理論,當(dāng)激光照射到流動(dòng)室內(nèi)流過的每一個(gè)細(xì)胞時(shí),由于細(xì)胞的物理特性,部分光線從細(xì)胞上經(jīng)不同的角度散射。其中,前向小角度散射光的光強(qiáng)可以反應(yīng)細(xì)胞體積;大角度散射光的光強(qiáng)可以反應(yīng)細(xì)胞核,漿復(fù)雜度和細(xì)胞顆粒的信息;而側(cè)向散射光的光強(qiáng)可以反應(yīng)細(xì)胞膜、核膜、細(xì)胞質(zhì)的變化。
因此,可以依據(jù)細(xì)胞表明光散射的特點(diǎn)對細(xì)胞進(jìn)行分類。用激光光源產(chǎn)生的單色光束直接進(jìn)入計(jì)數(shù)池的敏感區(qū),在不同角度(10度~7O度)對每個(gè)細(xì)胞進(jìn)行掃描分析,測定其散射光強(qiáng)度,從而提供細(xì)胞結(jié)構(gòu)、形態(tài)的光散射信息。由于粗顆粒細(xì)胞的散射強(qiáng)度比細(xì)顆粒細(xì)胞更強(qiáng),故光散射對細(xì)胞顆粒的構(gòu)型和顆粒質(zhì)量具有很好的區(qū)別能力。