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革蘭氏染色液使用注意事項(xiàng)以及保存方法：

用途：革蘭氏染色液用于分子生物學(xué)中的培養(yǎng)

原理：蛋白胨提供碳源和氮源；葡萄糖提供能源；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。

用法：稱取本品65.0g,加熱攪拌溶解于1000ml蒸餾水中121℃高壓滅菌15分鐘,冷卻至50℃左右時(shí),加入過濾除菌的氯霉素50mg,混勻,傾入無菌平皿。

【注意事項(xiàng)】：由于液體培養(yǎng)基不易長(zhǎng)期保管，現(xiàn)在均改制成粉末。

培養(yǎng)基有天然、人工兩種革蘭氏染色液般實(shí)驗(yàn)室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基，以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）調(diào)pH至7.2～7.4，若pH值超過7.6或遠(yuǎn)低于6.8，則大多數(shù)細(xì)胞不能生長(zhǎng)。RPMI-1640不耐高壓滅菌，使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。

革蘭氏染色液的保存

1）干粉，買了后定要保存在4度。有人保存在-20度我認(rèn)為沒有必要。但4度是非常必要的。保證期是有提示的。

2）配好的無血清培養(yǎng)基定保存在4度，保存不要超過3個(gè)月。用時(shí)根據(jù)提示要加入谷胺酰胺。

3）加入血清的培養(yǎng)基，好保存在4度不要超過1個(gè)月，從時(shí)間太長(zhǎng)，活性下降。當(dāng)然稍微長(zhǎng)點(diǎn)也不定出問題。但是根據(jù)細(xì)胞而定;如果原代培養(yǎng)，好新鮮，如果是腫瘤細(xì)胞，或僅維持傳代就不太要緊。但是原則是越新越好。

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