抗酸染色法步驟有哪些？
抗酸染色直接用于痰標(biāo)本時(shí),可以適當(dāng)增加標(biāo)本涂片的厚度,以提高檢出率.染厚涂片時(shí),須掌握復(fù)染色時(shí)間.如果背景過深,影響鏡檢.
奴卡菌及放線菌可呈弱抗酸性,取培養(yǎng)菌落涂片染色時(shí),呈現(xiàn)兩種現(xiàn)象,視野中有些菌細(xì)胞陽性,另外些則陰性;有時(shí)同個(gè)菌體上,紅色的深淺亦有不同,觀察時(shí)應(yīng)予注意.
抗酸染色有兩種常用方法：① 堿性復(fù)紅法又稱萋納(Ziehl—Neelsen)法. ② 熒光染料金胺O法(也稱金胺O-羅丹明B法).
堿性復(fù)紅染色法
試 劑
萋納石炭酸復(fù)紅溶液,堿性復(fù)紅乙醇飽和溶液 10毫升,5％石炭酸溶液 90毫升
脫色劑 *
濃鹽酸 3毫升,95％乙醇 97毫升
復(fù)染液(呂弗勒美藍(lán)液)
美藍(lán)乙醇飽和溶液 30毫升,10％氫氧化鉀 0.1毫升,蒸餾水 100毫升
染色方法
涂片經(jīng)火焰固定,加石炭酸復(fù)紅溶液,徐徐加熱至有蒸汽出現(xiàn),切不可沸騰.染5 分鐘(若染色奴卡菌需要加長時(shí)間),水洗.
加脫色劑,不時(shí)搖動(dòng)玻片至無紅色脫落為止,水洗.
加復(fù)染液,染0.5～l 分鐘,水洗.
干后鏡檢.分枝桿菌呈紅色,背景為藍(lán)色.
奴卡菌、放線菌標(biāo)本染色時(shí),脫色劑改用2％硫酸水溶液.
金胺O-羅丹明B染色法
染劑
羅丹明B液：羅丹明B 0.1克加蒸餾水100毫升;
0.1％金胺O液：金胺O 0.1克加蒸餾水95毫升,再加入純石炭酸5毫升,混勻;
3％鹽酸酒精;
稀釋美藍(lán)液：呂弗勒美藍(lán)液10毫升,加蒸餾水90毫升,混勻.
方法
涂片固定后加第1液30～90s.
棄去第1液后加第2液染15分鐘.
用第3液脫色1～2分鐘,水洗.
滴加第4液染30s,水洗,待干,熒光抗酸菌在暗背景中呈現(xiàn)金黃色熒光.
