幾個(gè)注意要點(diǎn)讓巴氏染色液的染色更加順利!
巴氏染色液在細(xì)胞染色上應(yīng)用廣泛,因?yàn)榧?xì)胞中的細(xì)胞核是由酸性物質(zhì)組成,它與堿性染料的親和力較強(qiáng);而細(xì)胞漿則相反,它含有堿性物質(zhì)和酸性染料的親和力較大。巴氏染色液利用這特性對(duì)細(xì)胞進(jìn)行多色性染色,細(xì)胞經(jīng)染色后能清晰地顯示細(xì)胞的結(jié)構(gòu),胞質(zhì)透亮鮮麗,各種顆粒分明,細(xì)胞核染色質(zhì)非常清楚,從而較容易發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞。通過巴氏染色可反映出細(xì)胞在炎癥刺激下和癌變后的形態(tài)學(xué)變化,對(duì)早期發(fā)現(xiàn)和診斷些病變和腫瘤具有較重要意義。
1、細(xì)胞核著色不佳
(1)細(xì)胞核著色過淺:
1)鹽酸分化時(shí)間過長(zhǎng)或蘇木素染液時(shí)間過長(zhǎng)。需要縮短分化時(shí)間或延長(zhǎng)堿化時(shí)間;每日加入少量新鮮蘇木素染液或重新配制蘇木素液。
2)在固定之前制片干燥。所以對(duì)巴氏染色的制片需要嚴(yán)格遵守濕固定的原則。
3)自來(lái)水的PH值偏酸性。使用堿性溶液。
(2)細(xì)胞核著色過深:
1)鹽酸溶液濃度不夠。適當(dāng)加入幾滴鹽酸以增加濃度。
2)制片用高于95%以上濃度的酒精固定后可以出現(xiàn)染色過深。應(yīng)用95%酒精固定。
2、細(xì)胞漿著色不佳
(1)如果全片內(nèi)胞漿都淡染,則需要延長(zhǎng)染色時(shí)間或更換新液。
(2)如果胞漿不分色,均為淺紅色。制片在固定前干燥或制片被有大量球菌樣細(xì)菌影響胞漿染色。此情況可以適當(dāng)增加染色時(shí)間能夠部分糾正不分色狀況。
(3)胞漿染成灰色或紫色,是由于蘇木素染色時(shí)間過長(zhǎng)或鹽酸分化不佳。經(jīng)過褪色后重新蘇木素可以糾正。
(4)由于標(biāo)本的不同,同樣配方的EA染液可造成偏藍(lán)、偏綠和偏紅,對(duì)不同的標(biāo)本應(yīng)該使用不同的EA染液。般認(rèn)為,EA36和EA50用于婦科標(biāo)本,而EA65或改良EA用于非婦科標(biāo)本。
(5)胞漿不分色的另重要原因是由于EA染液的PH值不恰當(dāng)所致。如染色為紅色,可以加少許磷鎢酸溶液糾正;如染色均為藍(lán)色或綠色,可以加少許飽和碳酸鋰溶液糾正。對(duì)于改良EA染液,每100ml染液加入2ml冰醋酸后染色效果更佳;染液使用更持久。