革蘭氏染色液是如何染色的?
病菌先經(jīng)過偏堿染劑結(jié)晶紫染色劑,再經(jīng)過碘液媒染(以提升染劑與體細胞的感染力)后,用酒精或甲苯脫色,再用復(fù)著色劑染色劑。不被脫色而維持原顏色者為革蘭紙陽性菌(G+);被脫色后又被沾染復(fù)染劑的顏色者為革蘭氏陽性菌(G-)。此方法可將病菌分成兩類。
革蘭氏染色的原理關(guān)鍵是運用兩大類病菌的細胞壁成份和構(gòu)造不樣。革蘭陰性桿菌的細胞壁中帶有較多的類脂質(zhì),而肽聚糖的含量偏少。若用酒精或甲苯脫色時,類脂質(zhì)被融解,提升了細胞壁的滲透性,使初染后的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物便于外滲,結(jié)果體細胞被脫色,經(jīng)復(fù)染后,又沾染復(fù)染液的顏色;而革蘭氏陽性菌細胞壁中肽聚糖的含量多且化學(xué)交聯(lián)度大,類脂質(zhì)含量少,經(jīng)酒精或甲苯過柱后,肽聚糖層的直徑縮小,滲透性減少,因而,體細胞仍保存初染時的顏色。
【試驗原材料、藥物及器材】
1、菌苗:大腸埃希菌(Escherichia coli),枯草芽孢桿菌(Bacillus Subtilis),橙黃色鏈球菌(Staphylococeus auresu)
2、染液:草酸銨結(jié)晶紫液,革蘭氏陽性菌碘液,95%的酒精,藏花紅液
3、容器清洗的載玻片6片、光學(xué)顯微鏡、酒精燈、接種環(huán)、香柏油路、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、醫(yī)用鑷子、玻璃缸、罐裝純凈水
【試驗流程】
1、取塑造12-24h的大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌和橙黃色鏈球菌各自抗酸染色、固定不動。
2、加草酸銨結(jié)晶紫著色劑滴,染色劑1分鐘。
3、傾去染液并且用洗桶裝水輕輕地清洗。
4、加碘液染1分鐘,手洗,隨后用吸水紙吸走。
5、將載玻片略歪斜,滴加95%酒精脫色(洗至流下來的酒精中無藍紫色時才行),隨后手洗。
6、加藏花紅復(fù)染,染色劑30分鐘,手洗,用吸水紙吸走或風(fēng)干。
7、用食油鏡鏡檢觀查。
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