影響革蘭氏染色方法的因素
影響革蘭氏染色方法的因素:
操作因素
1、涂片太厚 在涂片時(shí)細(xì)菌挑的太多，沒(méi)法分開(kāi)，在脫色時(shí)就不能將第步染上的結(jié)晶紫的顏色脫去，可能會(huì)使革蘭陰性菌也出現(xiàn)紫色，誤認(rèn)為革蘭陽(yáng)性菌。
2、脫色時(shí)間 陽(yáng)性菌透性小，不易被脫色，陰性菌透性大，易脫色；但這是在固定的時(shí)間條件下的結(jié)果，如果延長(zhǎng)脫色時(shí)間，也會(huì)使脫色劑滲透進(jìn)陽(yáng)性菌的細(xì)胞壁中，使染上的結(jié)晶紫脫去顏色，后染上復(fù)紅的顏色，變成革蘭陰性菌。而脫色時(shí)間太短的話又會(huì)使陰性菌染上的結(jié)晶紫不能完全脫色，出現(xiàn)紫色，誤認(rèn)為革蘭陽(yáng)性菌。
3、固定方法 固定不僅能殺死細(xì)菌，改變細(xì)菌對(duì)染料的通透性，還能使細(xì)菌吸附在玻片上，保持原有的形態(tài)結(jié)構(gòu)。固定方法是將干燥后的細(xì)菌涂片以中等速度通過(guò)火焰三次，以玻片觸及手背皮膚熱而不燙為宜。但在實(shí)際操作中有的同學(xué)將玻片在火焰上烤的太久，改變了細(xì)菌原有的通透性，會(huì)使細(xì)菌的染色性發(fā)生變化。影響了染色的結(jié)果。
細(xì)菌因素
1、細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)間 細(xì)菌的典型形態(tài)、染色性是在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，取這時(shí)的細(xì)菌做革蘭染色可以反應(yīng)細(xì)菌的真實(shí)的染色性。如果細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)間太長(zhǎng)，變成了老齡菌，染色性就會(huì)發(fā)生變化，可能會(huì)使革蘭陽(yáng)性菌染成革蘭陰性菌。
2、培養(yǎng)基的成分 般認(rèn)為革蘭陽(yáng)性菌體內(nèi)含有特殊的核蛋白質(zhì)鎂鹽與多糖的復(fù)合物，它與碘和結(jié)晶紫的復(fù)合物結(jié)合很牢，不易脫色。但是如果培養(yǎng)基中缺乏核蛋白質(zhì)鎂鹽就不能合成菌體成分的核蛋白質(zhì)鎂鹽，細(xì)菌與碘和結(jié)晶紫的復(fù)合物結(jié)合就不牢固，容易脫色，可能會(huì)使革蘭陽(yáng)性菌染成革蘭陰性菌。
染液因素
1、碘液 碘液作為媒染劑能增加染料與被染物的親和力。如果碘液放置時(shí)間太長(zhǎng)，或經(jīng)日光照射失效，失去媒染劑的作用，就可能使結(jié)晶紫與細(xì)菌結(jié)合的不牢固，容易被脫色，使革蘭陽(yáng)性菌染成革蘭陰性菌。
2、結(jié)晶紫 結(jié)晶紫的濃度太高，就會(huì)使染上的顏色不容易被酒精脫色，可能會(huì)使革蘭陰性菌染成革蘭陽(yáng)性菌。
3、酒精 酒精作為脫色劑，革蘭氏染色的脫色酒精濃度為95% ，在此濃度下革蘭陽(yáng)性菌染上的結(jié)晶紫不易被脫去，保留紫色，革蘭陰性菌染上的結(jié)晶紫容易被脫去，后呈紅色。但當(dāng)酒精的濃度為70% 時(shí)，它的脫色能力強(qiáng)，可能使革蘭陽(yáng)性菌染上的結(jié)晶紫也被脫去，使革蘭陽(yáng)性菌染成革蘭陰性菌。
