革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法
革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的種鑒別染色法,1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立
細(xì)菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶染色,而經(jīng)碘液媒染后,用酒精脫色,在定條件下有的細(xì)菌此色不被脫去,有的可被脫去,因此可把細(xì)菌分為兩大類,前者叫做革蘭氏陽性菌(G+),后者為革蘭氏陰性菌(G—)。為觀察方便,脫色后再用種紅色染料如堿性蕃紅等進(jìn)行復(fù)染。陽性菌仍帶紫色,陰性菌則被染上紅色。有芽胞的桿菌和大多數(shù)和球菌,以及所有的放線菌和真菌都呈革蘭氏正反應(yīng);弧菌,螺旋體和大多數(shù)致病性的無芽胞桿菌都呈現(xiàn)負(fù)反應(yīng)。
[原理]:革蘭氏染色目前有三種觀點(diǎn):等電點(diǎn)學(xué)說、化學(xué)學(xué)說和滲透學(xué)說。
1.等電點(diǎn)學(xué)說,革蘭氏陽性菌的等電點(diǎn)在PH2-3,比陰性菌(PH4-5)低,加之碘為弱氧化劑,可降低革蘭氏陽性菌的等電點(diǎn),致使兩類菌的等電點(diǎn)差異擴(kuò)大,因此陽性菌和堿性染料的結(jié)合力比陰性菌更強(qiáng)。
2.化學(xué)學(xué)說,碘液在菌體內(nèi)與結(jié)晶紫結(jié)合后又和菌體內(nèi)核糖核酸鎂鹽-蛋白質(zhì)復(fù)合物結(jié)合,此結(jié)合物不易被丙酮酒精脫掉,呈革蘭氏染色陽性。因革蘭氏陰性菌缺乏核糖核酸鎂鹽,故對碘與結(jié)晶紫結(jié)合物攝取少,且不牢固,易被丙酮酒精脫色而呈革蘭氏染色陰性。
3.滲透學(xué)說,乙醇使陽性菌所含粘肽多糖脫水而致細(xì)胞壁間隙縮小,通透性降低,在菌體內(nèi)保留了染料-碘復(fù)合物,呈紫色。陰性菌含粘肽少,細(xì)胞壁變化不大,通透性不受影響,菌體內(nèi)的染料-碘復(fù)合物較易透出,失去紫色,被復(fù)染成為紅色。