革蘭氏染色液的特性與鑒定原理
革蘭氏染色液屬復(fù)染法，即將標(biāo)本固定后，先用龍膽紫染色，加碘液媒染后用酒精脫色，再用蕃紅復(fù)染。染色后除可以看到細(xì)菌形態(tài)外，還可將細(xì)菌分為兩大類，即不被酒精脫色而保留紫色者為革蘭氏陽性菌（G+）。被酒精脫色復(fù)染成紅色者為革蘭氏陰性菌（G-）。革蘭氏染色原理尚不肯定，可能與細(xì)菌所帶核糖核酸、細(xì)菌壁結(jié)構(gòu)通透性、等電點(diǎn)等因素有關(guān)。致病菌如金黃色葡萄球菌、綠色溶血性鏈球菌、肺炎球菌、白喉?xiàng)U菌、碳疽桿菌等屬革蘭氏染色陽性菌。百日咳桿菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌、霍亂弧菌、流行性腦膜炎雙球菌、淋病雙球菌等均屬革蘭氏陰性。
該染色法所以能將細(xì)菌分為G+菌和G-菌，是由這兩類菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)和成分的不同所決定的。G-菌的細(xì)胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質(zhì)，而且肽聚糖層較薄、交聯(lián)度低，故用乙醇或丙酮脫色時(shí)溶解了類脂質(zhì)，增加了細(xì)胞壁的通透性，使初染的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，結(jié)果細(xì)菌就被脫色，再經(jīng)蕃紅復(fù)染后就成紅色。G+菌細(xì)胞壁中肽聚糖層厚且交聯(lián)度高，類脂質(zhì)含量少，經(jīng)脫色劑處理后反而使肽聚糖層的孔徑縮小，通透性降低，因此細(xì)菌仍保留初染時(shí)的顏色，呈現(xiàn)藍(lán)紫色。
革蘭氏染色液在實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)假陽性和假陰性的結(jié)果，假陽性主要是由于脫色不完全，可能是由于涂片過厚，或者是結(jié)晶紫染色過度，導(dǎo)致脫色不完全。假陰性可能是因?yàn)榧?xì)胞固定過度，造成細(xì)胞壁通透性的改變，而出現(xiàn)假陰性結(jié)果；另外，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間太長，可能已經(jīng)有部分細(xì)胞發(fā)生死亡或者自溶，也導(dǎo)致細(xì)胞壁通透性的改變而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
